美国abraxis麻痹性贝类毒素(PSP)检测试剂盒
PN 52255B
1．概述
本检测采用酶联免疫法定量检测麻痹性贝类毒素的存在。神经性贝毒是一种毒素，石房蛤毒素是麻痹性贝类毒素的一种。本检测可用于水产样本对贝类毒素的定性和定量检测，例如甲壳类动物的样本。对于甲壳类动物的需要提前制备样本。如果条件允许，阳性样本可以做HPLC，GC/MS或其他方法确认。
2．安全性说明
标准品溶液含有少量的石房蛤毒素。底物溶液含有四甲基联苯胺，终止液还有稀硫酸。避免皮肤与粘膜与终止液接触。若终止液与皮肤接触，可用水洗去。
3．贮藏与稳定性
试剂盒贮存在4-8°C。使用前试剂盒中溶液要恢复到室温（20—25度）。在保质期内试剂盒都可以正常使用。
4．检测原理
本实验采用直接竞争ELISA方法，用特异性抗体识别石房蛤毒素。样本中的石房蛤毒素可与石房蛤毒素-酶结合物竞争，同包被在微孔板上的兔抗-石房蛤毒素抗体结合。石房蛤毒素抗体与包被在微孔底部的二抗结合。洗板后加入底物溶液，显蓝色。蓝色的深度与石房蛤毒素在样本中的浓度成反比。颜色反应在规定时间内终止，颜色用酶标仪读值。每孔的样本浓度值可以通过标准曲线来读取。
A.试剂盒组成
1．真空包装微孔板 （12×8条），包被一种羊抗兔二抗
2．标准液（6）：0, 0.02, 0.05, 0.1,0.2 和0.4 ng/mL (ppb)
3．1 瓶6mL抗体（兔抗石房蛤毒素抗体）
4．1 瓶6mL石房蛤毒素-HRP酶标记物
5．2瓶25ml样品稀释缓冲液(10倍浓缩)(即用即配，例如：10ml浓缩缓冲液+90ml蒸馏水)
6．1瓶100ml洗板缓冲液(5倍浓缩) (即用即配，例如：10ml浓缩缓冲液+40ml蒸馏水)
7．1 瓶12 mL 底物（显色液TMB）
8．1 瓶 12mL 终止液
C.操作步骤
1、在对应的微孔中加入50μL的标准和样品（推荐做2-3个重复）
2、每个测试孔都加入50 μL 石房蛤毒素酶标记物溶液。
3、每个测试孔都加入50 μL石房蛤毒素抗体溶液，用封口膜把微孔板盖上，轻轻的震荡微孔板30秒使里面的液体混匀。不要使液体洒出。
4、在室温下孵育30分钟。
5、孵育完成后，把封口膜取掉，将微孔中的溶液用力地倒入水槽中，用1 X的洗液洗板3次，每孔每次至少加入250 μL1 X的洗液。拍板，去掉残留的洗液。
6、每个测试孔加入100μL的显色液（底物）。封口膜把微孔板盖上，轻轻的震荡微孔板30秒使里面的液体混匀。不要使液体洒出。室温孵育20-30分钟，此步骤避免太阳光照射。
7、每个测试孔加入100μL终止液。
8、用酶标仪在450nm 下读取每个孔的吸光度值（OD）（在加入终止液15分钟内完成）。
D 结果分析
结果分析可以利用商业ELISA分析软件(4-parameters,Logit/Log)。手工计算可以先计算标准的吸光度值的平均值，然后计算每个标准的%B/B0（用其它标准的吸光度值除以零标准的吸光度值乘以100%）。以每个标准的%B/B0做Y轴，以每个标准的石房蛤毒素的浓度做X轴构建标准曲线。通过利用标准曲线，把样品的%B/B0代入标准可以计算出样品中冈田酸的浓度。样品中石房蛤毒素的含量小于0.02 ppb认为阴性。当样品中石房蛤毒素的含量大于0.4 ppb要稀释后再测定。 |
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